Νέο άρθρο Γερμανών επιστημόνων αξιολογημένο από κριτές γελοιοποιεί περαιτέρω τη ρυθμιστική εποπτεία του ζητήματος της μόλυνσης DNA.
Σας είπαν ψέματα - ή δεν κοίταξαν ποτέ. Γιατί;
*του Jonathan Engler*
Μόλις ενημερώθηκα για μια νέα δημοσίευση στο περιοδικό “Methods and Protocols”, το οποίο περιγράφει τον εαυτό του ως “ένα διεθνές περιοδικό ανοιχτής πρόσβασης, με αξιολόγηση από κριτές, που στοχεύει να καθιερώσει και να περιγράψει νέες πειραματικές τεχνικές στα πεδία των Επιστημών της Ζωής, της Χημείας και των Βιοιατρικών Επιστημών και δημοσιεύεται διμηνιαία διαδικτυακά από το MDPI”.
Ο κύριος συγγραφέας είναι η Brigitte Koenig, καθηγήτρια Ιατρικής Μικροβιολογίας και Ιολογίας, Λοιμώδους Ανοσολογίας και Λοιμώδους Επιδημιολογίας στο Πανεπιστήμιο της Λειψίας. Εδώ είναι τα σημεία - αναπαράγονται κυρίως αυτολεξεί από την περίληψη και μερικά άλλα αποσπάσματα από το πλήρες κείμενο.
Οι ακαθαρσίες DNA μπορούν να επηρεάσουν την ασφάλεια των γενετικά τροποποιημένων φαρμακευτικών προϊόντων. Συνεπώς, πρέπει να καθοριστεί μια συγκεκριμένη οριακή τιμή για αυτά κατά τη διάρκεια της άδειας κυκλοφορίας.
Αυτό ισχύει ιδιαίτερα για τα εμβόλια mRNA, καθώς για την παραγωγή τους χρησιμοποιούνται μεγάλες ποσότητες προτύπων DNA.
Επιπλέον, κατά την ποσοτικοποίηση της συνολικής περιεκτικότητας DNA στο τελικό προϊόν, πρέπει να παρατηρήσουμε ότι, εκτός από το δραστικό συστατικό mRNA, οι ακαθαρσίες DNA είναι επίσης εγκλωβισμένες σε λιπονανοσωματίδια (LNP) και επομένως είναι δύσκολο να ποσοτικοποιηθούν.
Στην πραγματικότητα, ο κατασκευαστής του εμβολίου mRNA Comirnaty (BioNTech/Pfizer) μετρά μόνο τις ακαθαρσίες DNA στη δραστική ουσία μέσω μιας ποσοτικής αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (qPCR), της οποίας η αλληλουχία DNA στόχος είναι μικρότερη από μόλις 1% του αρχικά προστιθέμενου προτύπου DNA.
Παραμένει πράγματι η αλληλουχία στόχος, η οποία έχει μήκος μόνο 69 ζεύγη βάσεων, σε μια ποσότητα που είναι ανάλογη με τις άλλες αλληλουχίες που απομένουν μετά την πέψη της DNase και τα επακόλουθα στάδια διήθησης; Εάν δεν δοθεί η αναλογικότητα, οποιαδήποτε παρέκταση είναι βέβαιο ότι είναι λανθασμένη.
Αυτό σημαίνει ότι δεν πραγματοποιείται άμεσος ποσοτικός προσδιορισμός του DNA και η συμμόρφωση με την οριακή τιμή για μόλυνση DNA εκτιμάται μόνο από τα δεδομένα qPCR, χρησιμοποιώντας μαθηματικές μεθόδους παρέκτασης.
Ωστόσο, είναι επίσης δυνατό να διαλυθούν τα λιπονανοσωματίδια με ένα απορρυπαντικό, για να μετρηθεί άμεσα η μόλυνση DNA στο τελικό προϊόν, χρησιμοποιώντας φασματοσκοπικές μεθόδους φθορισμού. Η πειραματική δοκιμή αυτής της προσέγγισης επιβεβαιώνει ότι με αυτόν τον τρόπο μπορούν να ληφθούν αξιόπιστες τιμές.
Οι διαθέσιμες πληροφορίες και τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι το έτοιμο προς χρήση εμβόλιο mRNA Comirnaty περιέχει ακαθαρσίες DNA που υπερβαίνουν την επιτρεπόμενη οριακή τιμή κατά αρκετές εκατοντάδες φορές και, σε ορισμένες περιπτώσεις, ακόμη και περισσότερες από 500 φορές και ότι αυτό πέρασε απαρατήρητο επειδή η ποσοτικοποίηση του DNA που πραγματοποιείται ως μέρος της δοκιμής παρτίδας μόνο σε επίπεδο δραστικής ουσίας φαίνεται να είναι μεθοδολογικά ανεπαρκής όταν χρησιμοποιείται qPCR, όπως εξηγείται παραπάνω.
Τα αποτελέσματα των μετρήσεων των ίδιων των επιστημόνων απεικονίζονται σε αυτό το σχήμα [1]:
Η πράσινη γραμμή δείχνει το ρυθμιστικό όριο για τη μόλυνση DNA. Αυτή η μελέτη βασικά δείχνει ότι πολύ περισσότερο DNA είναι μετρήσιμο όταν τα LNP έχουν αφομοιωθεί (από το Triton-x-100 [2]). Το γεγονός ότι το πρόσθετο DNA που βρέθηκε είναι πολύ λιγότερο σε παρτίδες που έχουν λήξει σε σύγκριση με μη ληγμένες παρτίδες το υποστηρίζει, καθώς υποτίθεται ότι τα LNP διασπώνται με την πάροδο του χρόνου.
Θυμηθείτε ότι η κλίμακα είναι λογαριθμική. Η παρτίδα στο κάτω μέρος έχει σχεδόν 500 φορές το επιτρεπόμενο όριο DNA.
Αυτό είναι ένα καταδικαστικό κατηγορητήριο κατά των ρυθμιστικών αρχών και των κατασκευαστών, που έπαιξαν γρήγορα και χαλαρά με την υγεία δισεκατομμυρίων ανθρώπων.
Ωστόσο, αυτό το συγκεκριμένο ζήτημα είναι μόνο ένα από τα πολλά που αναδύονται τώρα…
Παραπομπές
1 Το σχήμα λέει:
Σχήμα 2. Ποσοτικοποίηση του συνολικού DNA σε παρτίδες του Comirnaty® με χρήση φθοριομετρίας Qubit® χωρίς και με την προσθήκη Triton-X-100 ως απορρυπαντικού για τη διάσπαση των λιπονανοσωματιδίων που περιέχονται στη σύνθεση του εμβολίου. Οι μετρούμενες τιμές που εμφανίζονται ως ράβδοι στο σχήμα αναφέρονται στη συνολική περιεκτικότητα DNA σε ng ανά δόση έτοιμου προς χρήση αραιωμένου Comirnaty®. Αυτά τα αποτελέσματα μετρήσεων πρέπει να συγκριθούν με την οριακή τιμή για το συνολικό περιεχόμενο DNA των 10 ng DNA ανά δόση για το Comirnaty®. Μία δόση αποτελείται από 300 µL έτοιµου προς χρήση εµβολίου. Σε όλες τις παρτίδες, βρέθηκε ότι η μετρούμενη τιμή DNA αυξήθηκε σημαντικά μετά την επεξεργασία με Triton-X-100. Όπως αναμενόταν, αυτό θα μπορούσε να είναι μόνο συνέπεια της διάλυσης των λιπονανοσωματιδίων και της προκύπτουσας απελευθέρωσης του DNA που ήταν περικλεισμένο σε αυτά. Στις παρτίδες 1 έως 4, οι οποίες είχαν λήξει όλες, βρέθηκε ότι μετά από επεξεργασία με Triton-X-100, μεταξύ 16% και 81% της μέγιστης μετρούμενης τιμής DNA είχε γίνει προσβάσιμο για μέτρηση λόγω της διάλυσης των λιπονανοσωματιδίων, ενώ στις παρτίδες 5 έως 7, οι οποίες εξακολουθούσαν να έχουν διάρκεια ζωής 11 έως 13 μήνες, αυτό ήταν ακόμη και μεταξύ 93% και 97% του συνολικού DNA. Αυτό δείχνει ότι τα λιπονανοσωματίδια από παρτίδες που έχουν λήξει μπορεί να έχουν αποσυντεθεί σε μεγάλο βαθμό, ακόμη και χωρίς επεξεργασία με απορρυπαντικό, ενώ αυτό προκλήθηκε από το Triton-X-100 μόνο στις παρτίδες με μεγαλύτερη διάρκεια ζωής. Ανεξάρτητα από αυτό, ωστόσο, πολύ υψηλές τιμές DNA ήταν μετρήσιμες σε όλες τις παρτίδες μετά την επεξεργασία με Triton-X-100, με αυτές τις τιμές να κυμαίνονται από 360 έως 534 φορές το επιτρεπόμενο όριο DNA ή 3600 έως 5340 ng DNA ανά δόση.
* Όριο 10 ng DNA/δόση (300 µL έτοιμου προς χρήση Comirnaty).
** Ολικό DNA ng/δόση μετά από θεραπεία με 1% Triton-X-100.
2 Ένα απορρυπαντικό - δείτε εδώ.