Μόλυνση από DNA των ενέσιμων προϊόντων COVID-19 (ακολουθούν και άλλα)
Μόλυνση από DNA των ενέσιμων προϊόντων COVID-19 (ακολουθούν και άλλα)
Υπάρχουν κυκλικά πλασμίδια (DNA) ως μολυντές...
*της Jessica Rose*
Το έπος της εργασίας που γίνεται στο εργαστηριακό πλαίσιο για την επιβεβαίωση ή την απόρριψη της παρουσίας μόλυνσης από DNA στα εμβόλια των Pfizer και Moderna συνεχίζεται. Σε αντίθεση με τις “βαριεστημένες” συναντήσεις που γίνονται κεκλεισμένων των θυρών, οι εργαστηριακές διαδικασίες απαιτούν χρόνο και φροντίδα (επίσης κεκλεισμένων των θυρών, αλλά για άλλους λόγους) και όσο κι αν το θέλετε, δεν μπορείτε να βιάσετε την αγάπη. Ή, τα αποτελέσματα εργαστηρίου. Καλύτερα να είσαι έξυπνος και προσεκτικός, παρά πρώτος.
…Τα αποτελέσματα συνεχίζουν να κυλούν σαν ένα γυάλινο κύμα 1 μέτρου στο διάλειμμα της ημέρας, σε ένα μέρος που κανείς δεν γνωρίζει…
Το νεότερο άρθρο του Anandamide τιτλοφορείται: "Η αλληλουχία των δισθενών εμβολίων Pfizer που έχουν υποστεί αγωγή με RNase A αποκαλύπτει ενδείξεις αλληλούχισης ζευγαριού άκρου κυκλικών πλασμιδίων και μια ενδιάμεση παραλλαγή 72 bp στον προαγωγέα SV40" και επιβεβαιώνει την παρουσία κυκλικών DNA, σε αντίθεση με γραμμικά DNA , ως μολυντές στα δοκιμασμένα φιαλίδια.
Παρεμπιπτόντως, αν θέλετε να παρακολουθήσετε ένα καταπληκτικό ντοκιμαντέρ για την προέλευση του ονόματος Anandamide, παρακαλώ να το κάνετε. Ονομάζεται “The Scientist” και είναι πολύ σχετικό με τα συντριπτικά χτυπήματα που δέχεται η πραγματική επιστήμη, μέχρι σήμερα.
Για να συνοψίσουμε την τρέχουσα κατάσταση, η ομάδα του Kevin ανέλυσε την αλληλουχία τόσο του RNA, όσο και του DNA σε δείγματα ενέσιμων προϊόντων Moderna και Pfizer. Χρησιμοποίησαν ένα κιτ RNA-Seq, αλλά δεδομένου ότι αυτή η μέθοδος ευνοεί τον προσδιορισμό αλληλουχίας RNA, συνειδητοποίησαν ότι θα μπορούσε στην πραγματικότητα να υποτιμήσει τα επίπεδα μόλυνσης από DNA.
Εφόσον ήθελαν να εκτιμήσουν την ποσότητα μόλυνσης από DNA και να ποσοτικοποιήσουν την αναλογία γραμμικού προς κυκλικό πλασμιδικό DNA, προχώρησαν ένα βήμα παραπέρα και κατεργάστηκαν τα δείγματα με RNase A (αυτό απαλλάσει από οποιοδήποτε RNA τα δείγματα) και προσδιορίστηκε η αλληλουχία του υπόλοιπου DNA.
Παρεμπιπτόντως, κάθε φορά που βλέπετε την ένδειξη “-άση” σε μια λέξη, σημαίνει ότι έχετε να κάνετε με ένα ένζυμο, που είναι απλώς ένας βιολογικός καταλύτης μιας χημικής αντίδρασης. Έτσι, η RNase δρα απλώς για να διασπάσει το RNA σε μικρά κομμάτια RNA. Κάπως όπως όταν μαγειρεύετε τα μακαρόνια πολύ ώρα και όταν τα βγάζετε από την κατσαρόλα, σπάνε σε μικρότερα κομμάτια. Περίπου. Το πραγματικό ερώτημα είναι: είναι ακόμα μακαρόνια;
Το παρακάτω στιγμιότυπο οθόνης είναι από αυτό το τελευταίο άρθρο και δείχνει την έκδοση Pfizer του πλασμιδικού φορέα στα αριστερά και τον φορέα αλληλουχίας RNase A που παράγεται από τη συναρμολόγηση στα δεξιά.
Το πρώτο πράγμα που παρατήρησα ήταν ότι το πλασμίδιο που αποκάλυψε η Pfizer περιέχει την ουρά πολυ-Α στην πλασμιδική αλληλουχία. Ως σημείο ενδιαφέροντος, αυτό εξοικονομεί το βήμα της προσθήκης του μετά την παραγωγή mRNA, ωστόσο, είναι προβληματικό, επειδή τα βακτήρια δεν υποστηρίζουν μεγάλες εκτάσεις As (οτιδήποτε μεγαλύτερο από 80 AA είναι πάρα πολύ).
Το μακρύτερο πολυ-Α μπορεί να προκαλέσει συμβάντα ανασυνδυασμού, που είναι κακό για την παραγωγή κλινικού υλικού. Επίσης, εάν θέλετε να επεκτείνετε την ουρά πολυ-Α, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε μια πολυμεράση πολυ-Α στη συνέχεια, αλλά αυτό κοστίζει πολλά χρήματα για να το κάνετε. Θα μπορούσε επίσης να προκαλέσει προβλήματα όσον αφορά τις διαφορετικές κατανομές των μηκών ουράς πολυ-Α που θα προέκυπταν, οι οποίες, φυσικά, θα έπρεπε να μετρηθούν και να παρακολουθηθούν, δηλαδή: αναπαραγωγιμότητα των μηκών ουράς πολυ-Α μεταξύ παρτίδων με χρήση ποιοτικών (και ποσοτικών) μεθόδων.
Όλοι γνωρίζουμε πόσο καλός είναι ο ποιοτικός έλεγχος σε σχέση με αυτά τα προϊόντα, οπότε αν όντως πρόσθεσαν το πολυ-Α ως εκ των υστέρων σκέψη, είμαι βέβαιη ότι διατήρησαν τη συνέπεια σε όλες τις διαφορετικές τοποθεσίες παραγωγής. Ανιχνευτής σαρκασμού σημαίνει συναγερμό...
Εδώ είναι το στιγμιότυπο οθόνης.
Ακολουθούν ορισμένοι ορισμοί που μάλλον θα έπρεπε να έχω ήδη δώσει:
Στη γενετική, ένας προαγωγέας είναι μια αλληλουχία DNA στην οποία συνδέονται πρωτεΐνες, για να ξεκινήσει η μεταγραφή ενός μεμονωμένου RNA από το DNA κατάντη του προαγωγέα [1]. Ελέγχει την έκφραση του γονιδίου.
Το SV40 είναι μια συντομογραφία του Simian Virus 40, ενός πολυομαϊκού ιού που βρίσκεται τόσο σε πιθήκους, όσο και σε ανθρώπους. Είναι ένας προαγωγέας θηλαστικών με υψηλή ικανότητα οδήγησης έκφρασης με στενή συγγένεια με την RNA πολυμεράση και μπορεί να κατευθύνει τη μαζική σύνθεση του mRNA. Βελτιώνει το επίπεδο γονιδιακής έκφρασης πολλών κυττάρων-ξενιστών [2]. Προωθεί την έκφραση συγκεκριμένων γονιδίων στα θηλαστικά.
Η αρχή της αντιγραφής (ORI ή ori) είναι μια συγκεκριμένη αλληλουχία σε ένα γονιδίωμα, από την οποία ξεκινά ο αναδιπλασιασμός [3]. Από εκεί αρχίζει η αντιγραφή.
Το KanR είναι μια κασέτα γονιδίου αντοχής στην καναμυκίνη [4]. Προσδίδει αντοχή στην καναμυκίνη.
Επιστροφή στα βασικά.
Ο προσανατολισμός των ενδείξεων του ζευγαρωμένου άκρου (δείχνουν προς τα έξω - φαίνονται με πράσινο χρώμα) παρέχει επίσης ισχυρές ενδείξεις ότι το πλασμίδιο είναι κυκλικό. Αναφερόμενος στο αρχικό έγγραφο του EMA με τίτλο: "Rapporteur Rolling Review review critical assessment report - Quality aspects" της 19ης Νοεμβρίου 2020, όπου η Pfizer ενημερώθηκε ότι έπρεπε να αντιμετωπίσει ορισμένα σοβαρά προβλήματα, στη σελίδα 32 του εγγράφου με δυνατότητα λήψης που παρέχεται από τη Sasha, αναφέρει ξεκάθαρα τα εξής:
Δεν έχουν παρασχεθεί περιγραφές των αναλυτικών μεθόδων που χρησιμοποιούνται για τον έλεγχο του προτύπου γραμμικού DNA, ούτε αποδεικτικά στοιχεία σχετικά με την πιστοποίηση/επικύρωσή τους (OC).
Αυτό είναι μόνο ένα από τα πολλά πράγματα που δεν παρασχέθηκαν, παρεμπιπτόντως. Εδώ είναι το έγγραφο. Παρακαλώ διαβάστε το. Πρόσθεσα αριθμούς σελίδων.
Ο Kevin εμβαθύνει σε μερικά από αυτά τα άλλα ζητήματα που εγείρονται από τον EMA, που σχετίζονται με πιθανά μέρη όπου θα μπορούσε να εμφανιστεί μόλυνση dsDNA ή dsRNA (που θα μπορούσε να λειτουργήσει ως ανοσοενισχυτικό - πόντοι μπόνους από την άποψη του εμβολίου). Εξηγεί τις διαφορές μεταξύ αυτού που θα έπρεπε να είναι - σύμφωνα με την έκθεση του EMA - και του τι ήταν/είναι στην πραγματικότητα πολύ καλά, οπότε αφήνω στον αναγνώστη να διαβάσει και να αξιολογήσει.
Παρεμπιπτόντως, στο θέμα της μόλυνσης, ως σημείο ενδιαφέροντος, ο καθαρισμός του mRNA είναι πραγματικά ακριβός και πολύ σημαντικός. Εξασφαλίζει την απομάκρυνση πραγμάτων όπως το dsRNA, τα κομμένα προϊόντα mRNA, το υπολειμματικό DNA κλπ. και αν ο καθαρισμός ήταν πραγματικά αυστηρός, θα φανταζόμουν ότι τα προβλήματα με τη μόλυνση που βλέπουμε θα μειωνόταν πολύ αν δεν εξαλείφονταν. Αυτό μπορεί να είναι κάπως τεντωμένο, αλλά όχι αδύνατον.
Εδώ είναι κάτι που βρήκαν και είναι άκρως ανησυχητικό. Ο Kevin γράφει:
Η δειγματοληψία μόνο δύο φιαλιδίων της Pfizer παρέχει δύο διαφορετικούς φορείς έκφρασης; Αυτά τα φιαλίδια είναι από την ίδια παρτίδα. Τα ένθετα είναι 100% πανομοιότυπα και δεν σχετίζονται με τα δισθενή εμβόλια. Αναρωτιέμαι πόσα άλλα πλασμίδια υπάρχουν εκεί έξω;
Υπάρχουν διαφορετικοί τύποι φορέων έκφρασης που μπορούν να βρεθούν ακόμη και μέσα στις ίδιες παρτίδες. Λοιπόν, θα ήθελα να μπορούσα να πω ότι με εκπλήσσει αυτό, αλλά δεν είναι αλήθεια. Ο τεράστιος αριθμός θέσεων στη γραμμή παραγωγής του mRNA, όπου τα πράγματα θα μπορούσαν να πάνε στραβά, λέει την ιστορία αυτής της πιθανότητας. Ακόμα κι αν όλα γίνονται “σωστά” και γίνονται έλεγχοι και κρατούνται ισορροπίες, αυτό εξακολουθεί να είναι ΒΙΟΛΟΓΙΑ: τείνει στη μεταβλητότητα! Το ερώτημα για μένα είναι: γιατί τόσοι πολλοί φορείς έκφρασης εμφανίζονται εξαρχής;
Το τελευταίο σημείο στο οποίο θέλω να δώσω έμφαση από αυτήν την τελευταία δουλειά, είναι ο προωθητής SV40. Ο Kevin γράφει:
Μια γνωστή βελτίωση του προαγωγέα SV40 είναι εμφανής στο 1/2 των φιαλιδίων από την ίδια παρτίδα εμβολίου.
Τα πλήρη συμπεράσματα του Kevin μέχρι σήμερα, από αυτήν την πρόσφατα ενημερωμένη (και συνεχιζόμενη) ανάλυση:
Συμπεράσματα
Τα ζευγαρωμένα άκρα υποστηρίζουν την ύπαρξη κυκλικών πλασμιδίων στα δισθενή εμβόλια της Pfizer. Αυτό υποστηρίζεται από τον μετασχηματισμό σε ευαίσθητο στην καναμυκίνη E.coli. Η ακριβής αναλογία κυκλικού έναντι γραμμικού DNA εξακολουθεί να αξιολογείται, αλλά τα επίπεδα μόλυνσης του DNA υπερβαίνουν τις προδιαγραφές του EMA κατά πολλές τάξεις μεγέθους.
Η τεκμηρίωση του EMA αποκαλύπτει ότι οι ρυθμιστές δεν είναι ικανοποιημένοι με τις μοριακές μεθόδους που χρησιμοποιούνται για την αξιολόγηση της γραμμικοποίησης. Υπάρχουν ανησυχίες για μη ειδικές τιμές CT (<32) στις μεθόδους PCR που χρησιμοποιούνται για ποσοτικοποίηση. Εκφράζονται πρόσθετες ανησυχίες σχετικά με τη διακύμανση της δραστηριότητας της DNase I και τις μεθόδους που χρησιμοποιούνται για την αξιολόγηση της απόδοσής της.
Μια μακρά πολυ-Α οδός είναι εμφανής στους φορείς που μειώνουν τις πιθανότητες εκτός στόχου πολυαδενυλίωσης. Ο συνδετήρας 10bp δεν επιλύεται καλά με την αλληλουχία Illumina και τα δύο διανύσματα διαφέρουν επίσης σε αυτήν την τεχνητή άποψη.
Μια γνωστή βελτίωση του προαγωγέα SV40 είναι εμφανής στο 1/2 των φιαλιδίων από την ίδια παρτίδα εμβολίου.
Περίληψη
Υπάρχουν πράγματα στα φιαλίδια που δεν θα έπρεπε να υπάρχουν εκεί, σε σχέση με τη μόλυνση του DNA που προήλθε από κακή κατασκευή - πιθανότατα θα μπορούσε να είχε “λυθεί” στο στάδιο καθαρισμού.
Ο EMA γνωρίζει αυτές τις ανεπάρκειες και έδωσε εντολή στην Pfizer να τις αντιμετωπίσει. Προσπαθούν ό,τι καλύτερο μπορούν με τους περιορισμένους πόρους τους, αφού διοχέτευσαν αυτό το υλικό σε δισεκατομμύρια ανθρώπους…
Τα κυκλικά DNA είναι κακά νέα σε αυτό το πλαίσιο, επειδή είναι ικανά να αναπαραχθούν.
Η ουρά πολυ-Α κωδικοποιείται στο πλασμίδιο, το οποίο είναι αποτελεσματικό από την άποψη της παραγωγής. Τέλεια. Τι γίνεται όμως με τα θέματα που αναφέρθηκαν παραπάνω;
Οι συνέπειες της ενίσχυσης ή της βελτίωσης του προαγωγέα μένουν να φανούν, αλλά είναι ασφαλές να πούμε ότι η αύξηση της εμπλοκής της συνεχιζόμενης έκφρασης των γονιδίων της ακίδας και η παρατεταμένη έκφραση ακίδων μπορεί να μην είναι τόσο δημοφιλής, όσο η μελωδία των Technotronic…
1 https://en.wikipedia.org/wiki/Promoter_(genetics)
2 https://en.wikipedia.org/wiki/SV40