Νέα μελέτη δείχνει πόσο λίγα γνωρίζουμε για το πώς "λειτουργούν" τα εμβόλια mRNA
Πολύ διαφορετικά επίπεδα πρωτεΐνης ακίδας ανάλογα με τον τύπο κυττάρου
*της Joomi*
Μια πρόσφατη μελέτη υπογραμμίζει πόσο ανίδεοι είμαστε για το πώς λειτουργούν τα εμβόλια mRNA:
Θα εξετάσουμε μερικά βασικά ευρήματα της μελέτης.
Η ποσότητα της πρωτεΐνης ακίδας που εκφράζεται στην κυτταρική επιφάνεια εξαρτάται από τον τύπο του κυττάρου
Στη μελέτη, σε δύο διαφορετικούς τύπους κυττάρων (Jurkat ή K562) δόθηκαν είτε το εμβόλιο Comirnaty (Pfizer), είτε το Spikevax (Moderna).
Και τα δύο είναι εμβόλια mRNA, που υποτίθεται ότι κωδικοποιούν την πρωτεΐνη ακίδας και υποτίθεται ότι λειτουργούν βάζοντας τα κύτταρα να παράγουν πρωτεΐνη ακίδας στην επιφάνεια των κυττάρων που απορροφούν το εμβόλιο.
Το παρακάτω γράφημα δείχνει το ποσοστό των κυττάρων που εξέφρασαν πρωτεΐνη ακίδας στην επιφάνειά τους, αφού τους χορηγήθηκε δόση 1μL ή 10μL από κάθε εμβόλιο:
Τα πιο αριστερά γραφήματα εμφανίζουν αποτελέσματα για τα κύτταρα Jurkat, ενώ τα δεξιά εμφανίζουν αποτελέσματα για τα κύτταρα K562.
Εάν επικεντρωθούμε μόνο στα κύτταρα που έλαβαν 1 μL Spikevax (που κυκλώνονται με κόκκινο παρακάτω), μπορούμε να δούμε ότι τα κύτταρα Jurkat είχαν πολύ υψηλότερο ποσοστό κυττάρων που εξέφραζαν πρωτεΐνη ακίδας σε σύγκριση με τα κύτταρα K562 (προσέξτε τη διαφορά στις κλίμακες):
Βλέπουμε το ίδιο πράγμα, εάν εστιάσουμε σε όλα τα κύτταρα που έλαβαν 10 μL Spikevax (με κόκκινο κύκλο παρακάτω). Τα κύτταρα Jurkat είχαν πολύ υψηλότερο ποσοστό κυττάρων που εξέφραζαν πρωτεΐνη ακίδας σε σύγκριση με τα κύτταρα Κ562 (και πάλι, σημειώστε τη διαφορά στις κλίμακες):
Αυτό είναι εκπληκτικό. Δεν είναι σαφές γιατί τα κύτταρα Jurkat είχαν υψηλότερη έκφραση ακίδας σε σύγκριση με τα κύτταρα K562.
Το Comirnaty έδειξε λιγότερη έκφραση ακίδας σε σύγκριση με το Spikevax
Βλέπουμε επίσης ότι τα κύτταρα στα οποία χορηγήθηκε το εμβόλιο Comirnaty εμφάνισαν πολύ λιγότερη έκφραση ακίδας σε σύγκριση με το Spikevax. Παρακάτω είναι το ίδιο γράφημα, αλλά με όλες τις δόσεις Comirnaty (πράσινες) κυκλωμένες:
Αυτό μπορεί να μην είναι τόσο περίεργο, δεδομένου ότι το Spikevax έχει υψηλότερη συγκέντρωση mRNA. Σε αυτή τη μελέτη, 1 και 10 μL και των δύο εμβολίων αντιστοιχούσαν σε 0,1 και 1 μg mRNA του εμβολίου Comirnaty και 0,2 και 2 μg mRNA του εμβολίου Spikevax.
Ωστόσο, αυτό που προκαλεί έκπληξη είναι ότι στα κύτταρα Jurkat, δεν υπάρχει τόσο μεγάλη διαφορά στην έκφραση ακίδας μεταξύ των κυττάρων που έλαβαν 1 μL και 10 μL Comirnaty. Παράξενο.
Η ελεύθερη ακίδα δείχνει διαφορετικό μοτίβο
Η πρωτεΐνη ακίδας που βρίσκεται στην επιφάνεια των κυττάρων δεν είναι η μόνη πρωτεΐνη ακίδας που υπάρχει. Ορισμένες πρωτεΐνες ακίδας ή περικομμένες (συντομευμένες) εκδοχές της, ελευθερώνονται από την επιφάνεια των κυττάρων και πηγαίνουν στο μέσο στο οποίο βρίσκονται τα κύτταρα.
Στο παρακάτω γράφημα, η πιο αριστερή εικόνα δείχνει ελεύθερη ακίδα που σχετίζεται με τα κύτταρα Jurkat, ενώ το πιο δεξιό γράφημα δείχνει το ίδιο, αλλά για τα κύτταρα K562:
Εάν εστιάσουμε στις ράβδους που έλαβαν 10µL Spikevax (κυκλωμένο με κόκκινο χρώμα), αυτή τη φορά, βλέπουμε περισσότερη ακίδα που σχετίζεται με τα κύτταρα K562 σε σύγκριση με τα κύτταρα Jurkat (παρατηρήστε τη διαφορά στις κλίμακες). Αυτό είναι το αντίθετο από αυτό που είδαμε με την ακίδα που ήταν προσαρτημένη στην επιφάνεια των κυττάρων.
Για το εμβόλιο Comirnaty, περιέργως, η υψηλότερη δόση δεν οδηγεί απαραίτητα σε περισσότερη ακίδα
Τώρα, αν εστιάσουμε στα κύτταρα που έλαβαν το Comirnaty (πράσινο), θα παρατηρήσουμε ότι όπως και με το Spikevax, τα κύτταρα K562 εμφάνισαν περισσότερη ελεύθερη πρωτεΐνη ακίδας σε σύγκριση με τα κύτταρα Jurkat. Στο παρακάτω γράφημα, όλα τα κύτταρα που έλαβαν το Comirnaty είναι κυκλωμένα:
Αλλά αυτό που είναι περίεργο είναι ότι με το Comirnaty, η υψηλότερη δόση εμβολίου δεν οδήγησε σε υψηλότερη έκφραση πρωτεΐνης ακίδας. Τι συμβαίνει;
Ορισμένα κύτταρα πεθαίνουν αφού τους χορηγηθεί το εμβόλιο
Παρακάτω φαίνεται το ποσοστό των κυττάρων που ήταν νεκρά ή ζωντανά μετά από 24 ώρες με 10 μL Spikevax στα κύτταρα Jurkat:
Δείχνει ότι περίπου το 3,66% των κυττάρων Jurkat πέθαναν.
Παρακάτω βλέπουμε το ποσοστό των κυττάρων που ήταν νεκρά ή ζωντανά μετά από 24 ώρες με 10 μL Spikevax, αλλά αυτή τη φορά, στα κύτταρα K562:
Δείχνει ότι περίπου το 11,4% των κυττάρων Κ562 πέθαναν.
Έτσι τα κύτταρα K562 φαίνεται να είναι πιο ευαίσθητα στην τοξικότητα του εμβολίου, σε σύγκριση με τα κύτταρα Jurkat.
Θα ήταν ενδιαφέρον να δούμε εάν περισσότερα κύτταρα θα είχαν πεθάνει, εάν οι ερευνητές εξέταζαν πέρα από τις 24 ώρες μετά τη χορήγηση του εμβολίου.
Είδαμε ενδείξεις αυτών των αποτελεσμάτων σε προηγούμενες μελέτες
Δεν είναι η πρώτη φορά που βλέπουμε ενδείξεις τοξικότητας εμβολίων. Για παράδειγμα, υπάρχουν μελέτες που δείχνουν ότι τα LNPs που χρησιμοποιούνται για τη μεταφορά των εμβολίων mRNA, είναι εξαιρετικά φλεγμονώδη (δείτε αυτό και αυτό). Και η ίδια η πρωτεΐνη ακίδας φαίνεται να είναι επιβλαβής για τα κύτταρα.
Δεν είναι επίσης η πρώτη φορά που βλέπουμε ότι η έκφραση της πρωτεΐνης ακίδας διαφέρει σε διαφορετικές κυτταρικές σειρές. Για παράδειγμα, πάρτε αυτήν τη μελέτη: Το mRNA του εμβολίου μπορεί να ανιχνευθεί στο αίμα 15 ημέρες μετά τον εμβολιασμό
Σε αυτή τη μελέτη, έδωσαν το εμβόλιο Comirnaty (Pfizer) σε κύτταρα ανθρώπινου μυελού των οστών (K562 και HL-60) και απομόνωσαν μονοπύρηνα κύτταρα και αιμοπετάλια περιφερικού αίματος (PBMCp).
Όλα τα κύτταρα φαινόταν να παίρνουν το εμβόλιο, αλλά η πρωτεΐνη ακίδας απουσίαζε στην επιφάνεια των κυττάρων PBMCp ή HL-60. Τα κύτταρα K562 είχαν κάποια έκφραση ακίδας, αν και μόνο 3 από τα 100 κύτταρα που αναλύθηκαν είχαν ακίδα.
Θυμηθείτε ότι η τρέχουσα μελέτη εξέτασε επίσης κύτταρα K562 στα οποία χορηγήθηκε Comirnaty, αλλά έδειξε υψηλότερο ποσοστό κυττάρων που εκφράζουν ακίδα. Γιατί η διαφορά; Ίσως να είχε να κάνει με τη δοσολογία του εμβολίου ή τις διαφορετικές μεθόδους μέτρησης της ακίδας.
Δεν καταλαβαίνουμε θεμελιώδη πράγματα για το πώς “λειτουργούν” τα εμβόλια mRNA
Το κύριο σημείο είναι το εξής: δεν καταλαβαίνουμε βασικά πράγματα για το τι συμβαίνει μετά την ένεση των εμβολίων mRNA στους ανθρώπους.
Για παράδειγμα, είδαμε ότι το εμβόλιο της Pfizer οδήγησε σε λιγότερη έκφραση πρωτεϊνών ακίδας και ωστόσο υπάρχουν μελέτες που φαίνεται να δείχνουν ότι η αποτελεσματικότητα μεταξύ της Pfizer και της Moderna είναι παρόμοια (παράδειγμα εδώ). Πώς θα μπορούσε να συμβαίνει αυτό;
Και τι εξηγεί τα διαφορετικά επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης ακίδας στις διαφορετικές κυτταρικές σειρές;
Τα κύτταρα Jurkat είναι κύτταρα Τ-λεμφοκυττάρων, που προήλθαν αρχικά από ένα 14χρονο αγόρι με λευχαιμία. Τα κύτταρα K562 είναι κύτταρα μυελού των οστών, που προήλθαν αρχικά από μια γυναίκα 53 ετών με λευχαιμία.
Διαφέρουν τα επίπεδα έκφρασης ακίδας μεταξύ αυτών των κυτταρικών σειρών επειδή προέρχονται από δύο διαφορετικά άτομα ή επειδή είναι διαφορετικοί τύποι κυττάρων ή και τα δύο; Τι θα συνέβαινε με τα κύτταρα της καρδιάς ή του εγκεφάλου; Πόση ακίδα θα εξέφραζαν, εάν κατά λάθος προσέλαβαν τα LNP των εμβολίων;
Και γιατί βλέπουμε περισσότερη ακίδα επιφάνειας στη μία κυτταρική σειρά, αλλά πιο ελεύθερη ακίδα στην άλλη; Μήπως επειδή μια από τις κυτταρικές σειρές εκφράζει περισσότερα ένζυμα που αποκόπτουν την ακίδα από την επιφάνεια των κυττάρων;
Παρεμπιπτόντως, οι ερευνητές αναφέρουν ότι μέρος της ελεύθερης ακίδας είχε τη μορφή κολοβωμένης (κοντής) ακίδας. Ίσως ήταν ακίδα που είχε διασπαστεί από ένζυμα ή ίσως διασπάστηκε το ίδιο το mRNA:
Εναλλακτικά, η έκθεση αξιολόγησης του εμβολίου Spikevax από τον Ευρωπαϊκό Οργανισμό Φαρμάκων (EMA) αναφέρει ότι “ο αιτών περιέγραψε μικρά είδη mRNA που μπορεί να εμφανιστούν λόγω αποτυχημένης μεταγραφής ή πρόωρου τερματισμού της μεταγραφής. Καθώς η πλειονότητα αυτών των βραχέων mRNA δεν περιέχει ουρά Poly A, η διαδικασία κατασκευής περιλαμβάνει στάδια χρωματογραφίας, τα οποία στοχεύουν στην απομάκρυνση αυτών των ακαθαρσιών σε μεγάλο βαθμό”. Ωστόσο, “παρατηρούνται πρόσθετες ζώνες με μια δοκιμασία μετάφρασης in vitro”, που πραγματοποιείται χρησιμοποιώντας το καθαρισμένο mRNA [6].
Παρόμοιο πρόβλημα αναφέρθηκε από τον κατασκευαστή του Comirnaty, αλλά, στην περίπτωση του Comirnaty, τα βήματα χρωματογραφίας δεν εκτελούνται [5]. Επομένως, μπορεί να υποτεθεί ότι ορισμένα από τα βραχέα είδη mRNA που υπάρχουν στα LNP των Spikevax και Comirnaty μεταφράζονται σε κολοβωμένες S-πρωτεΐνες, που δεν έχουν τη διαμεμβρανική περιοχή και μπορούν να εξέλθουν από τα κύτταρα, εξηγώντας το in vitro εύρημα της παρούσας μελέτης και τα ευρήματα in vivo από άλλους συγγραφείς [14, 24].
Μετάφραση: κάποια από τα mRNA μπορεί να είναι μικρότερα από αυτά που υποτίθεται ότι είναι, γεγονός που θα μπορούσε να οδηγήσει σε περικομμένες εκδόσεις της πρωτεΐνης ακίδας.
Ακόμα κι αν το mRNA έχει το σωστό μήκος, ίσως η διαδικασία μετάφρασης μερικές φορές ματαιώνεται νωρίς, λόγω όλων των αλλαγών που έγιναν στο mRNA, όπως η βελτιστοποίηση κωδικονίων που χρησιμοποιήθηκε, ή του γεγονότος ότι η Ν1-Μεθυλψευδουριδίνη χρησιμοποιήθηκε για να αντικαταστήσει την ουριδίνη στο mRNA. Ίσως αυτό μπορεί να οδηγήσει σε “mRNA” που μερικές φορές καταστρέφει τη διαδικασία μετάφρασης στα ριβοσώματα.
Ως συνήθως, όσο περισσότερα μαθαίνουμε για αυτά τα εμβόλια, τόσο περισσότερα ερωτήματα προκύπτουν…
